The relation of ethambutol resistance to embB mutations remains unclear, and there are no reports on ethambutol resistance from the Caribbean. We examined the sequence of embB in 57 distinct Multi-Drug Resistant (MDR) and non-MDR strains of Mycobacterium tuberculosis, mostly from Cuba and the Dominican Republic. embB306 codon mutations were found exclusively in MDR-TB, but in both ethambutol sensitive and resistant strains. Valine substitutions predominated in ethambutol resistant strains, while isoleucine replacements were more common in sensitive strains. Three ethambutol resistant MDR strains without embB306 substitutions had replacements in embB406 or embB497, but these were also found in ethambutol sensitive MDR strains. The results confirm previous findings that amino acid substitutions in EmbB306, EmbB406 and EmbB497 are found only in MDR-TB strains but in both phenotypically resistant and sensitive strains. One ethambutol resistant non-MDR strain did not have any embB mutation suggesting that other undefined mutations can also confer ethambutol resistance.

La relación entre resistencia a etambutol y mutaciones en embB no se ha establecido claramente y no existen comunicaciones sobre la resistencia a etambutol en cepas provenientes de países Caribeños. Se evaluó la secuencia del gen embB en 57 cepas de Mycobacterium tuberculosis multi-drogo resistentes (MDR) y no-MDR, la mayoría aislada en Cuba y República Dominicana. Se encontraron mutaciones en el codón embB306 exclusivamente en cepas MDR, tanto en cepas sensibles como resistentes a etambutol. Tres cepas MDR resistentes a etambutol, sin sustituciones en embB306, tenían mutaciones en los codones embB406 o embB497, pero estos cambios se encontraron también en cepas sensibles. Los resultados confirman otros estudios, mostrando que sustituciones aminoacídicas en EmbB306, EmbB406 y EmbB497 se encuentran exclusivamente en cepas MDR, tanto resistentes como sensibles a etambutol. Encontramos una cepa no MDR resistente a etambutol sin ninguna mutación en embB, sugiriendo que otras mutaciones aún no identificadas también pueden conferir resistencia a etambutol.

Introduction: development of new antituberculosis vaccines requires the characterization of the cell-mediated immune responses induced by mycobacterial antigens. Objective: to determine the immunogenic potential of ´Mycobacterium habana´ TMC-5135 when using subcutaneous vaccine in Balb/c mice. Methods: in this study, Balb/c mice were inoculated subcutaneously with live ´Mycobacterium habana´ TMC-5135. The production of IFN gamma in cell suspensions obtained from the lungs, the spleen and the lymph nodes after stimulation with mycobacterial antigens Ag85b or culture filtrate antigens (CFA) was recorded. Results: the production of IFN gamma after stimulation with CFA and Ag85b was higher in mice vaccinated with ´M. habana´ than in animals immunized with BCG. Conclusions: these results encourage new research on ´M. habana´ as vaccinal candidate against tuberculosis.

Introducción: el desarrollo de nuevas vacunas antituberculosas requiere de la caracterización de la respuesta de inmunidad celular, inducida por el nuevo candidato vacunal frente a los antígenos principales de Mycobacterium tuberculosis. Objetivo: determinar el potencial inmunogénico de ´Mycobacterium habana´ TMC-5135, cuando se usa como vacuna subcutánea en ratones Balb/c. Métodos: en este estudio se inocularon subcutáneamente ratones Balb/c con la cepa viva ´Mycobacterium habana´ TMC-5135 y se determinó la producción in vitro de IFN gamma en cultivos celulares de pulmón, bazo y ganglios inguinales estimulados con antígenos solubles totales y el antígeno 85b. Como grupo control se vacunaron ratones con BCG subcepa Phipps. Resultados: particularmente en los ganglios linfáticos inguinales, ambos antígenos indujeron mayor producción de IFN gamma en los ratones vacunados con ´Mycobacterium habana´que con BCG. Conclusiones: los resultados justifican la realización de nuevas investigaciones usando ´Mycobacterium habana´ TMC-5135 como candidato vacunal para prevenir la tuberculosis.

The participation of the National Laboratory of Reference and Research on Tuberculosis and Mycobacteria of "Pedro Kouri" Institute of Tropical Medicine in the organization of the bacteriological resources for the diagnosis and screening of cases in the primary health care, in support of the national program for control of tuberculosis, was described in this paper. Reference was made to the functions and main scientific activities of this laboratory, which is a PAHO/WHO collaborating center at the forefront of the tuberculosis diagnosis laboratory network in the country. The introduction and the implementation of state-of-the-art technologies have allowed valuable tools to be used to meet several challenges posed by tuberculosis and mycobacteria nowadays. Thanks to the implementation of a World Fund against AIDS, tuberculosis and malaria project, the diagnosis network has strengthened, which must contribute to the elimination of tuberculosis as a health problem in Cuba in the near future.

Se describe la participación del Laboratorio Nacional de Referencia e Investigaciones en Tuberculosis y Micobacterias del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", en la organización del recurso bacteriológico para el diagnóstico y la búsqueda de casos, fundamentalmente en la atención primaria de salud, en apoyo al Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. Se hace referencia a las funciones y principales actividades científicas de este Laboratorio Nacional, Centro Colaborador OPS/OMS, como cabecera de los laboratorios de la red de diagnóstico de la tuberculosis en el país. La introducción y aplicación de nuevas tecnologías de avanzada permite contar con valiosas herramientas para dar respuesta a los diferentes retos que plantean la tuberculosis y las micobacteriosis en la actualidad. Con la ejecución de un proyecto del fondo mundial de lucha contra el sida, la tuberculosis y la malaria, se ha fortalecido la red de diagnóstico, lo que debe contribuir, en un futuro cercano, a la eliminación de la tuberculosis como problema de salud en Cuba.

Introduction: The laboratory is a critical component in the diagnosis, treatment, prevention and control of tuberculosis. Objective: To analyze the behavior of quality control of bacilloscopy in provincial reference laboratories of Cuba, by the re-checkup of blind plates. Methods: The quality control was carried out by re-checkup method of plates at 5 424 plates of BAAR sputum received in the National Reference Laboratory of Tuberculosis and Mycobacteria of the "Pedro Kourí" Institute, originating in the laboratories of tuberculosis of Provincial Centers of Hygiene, Epidemiology and Microbiology of Cuba from 2007 to 2009. Results: Fifty four reading errors were identified; from them 20 false-positive, 13 false-negatives and 21 coding error. The sensitivity, specificity and concordance showed values of 84.7, 99.6 and 99.4 %, respectively. The concordance between the NRLTB PKI and the provincial tuberculosis laboratories assessed was of 99.4 % (Kappa rate 0.8105) and the discordance was only of 0.6 %. Conclusions: Results suggest an appropriate staff quality of the provincial laboratories staff to carry out the quality control of BAAR sputum BK. It is recommended to continue with visits to network laboratories to detect the deficiencies and to implement appropriate corrective measures to go on with the diagnosis quality of BK and so to eliminate the TB as a health problem in Cuba.

Introducción: El laboratorio es un componente crítico en el diagnóstico, tratamiento, prevención y control de la tuberculosis. Objetivo: Analizar el comportamiento del control de calidad de la baciloscopia en los laboratorios de referencia provinciales de tuberculosis de Cuba, mediante el método de rechequeo de láminas a ciegas. Métodos: Se realizó el control de calidad, por el método de rechequeo de láminas, a 5 424 láminas de esputo BAAR recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Tuberculosis y Micobacterias del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", procedentes de los laboratorios de tuberculosis de los Centros Provinciales de Higiene, Epidemiología y Microbiología de Cuba, desde el año 2007 hasta 2009. Resultados: Se identificaron 54 errores de lectura; de ellos, 20 falsos positivos, 13 falsos negativos y 21 errores de codificación. La sensibilidad, especificidad y concordancia mostraron valores de 84,7, 99,6 y 99,4 %, respectivamente. La concordancia entre el Laboratorio Nacional de Referencia de Tuberculosis y Micobacterias del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" y los laboratorios provinciales de tuberculosis evaluados fue de 99,4 % (índice de kappa 0,8105) y la discordancia fue de solo el 0,6 %. Conclusiones: Los resultados sugieren una adecuada calidad del personal de los laboratorios provinciales para realizar el control de calidad de la BK de esputo BAAR. Se recomienda continuar con las visitas a los laboratorios de la red para detectar las deficiencias e implementar las medidas correctivas oportunas con el fin de seguir mejorando la calidad del diagnóstico de la baciloscopia y así eliminar la tuberculosis como problema de salud en Cuba.

The participation of the National Laboratory of Reference and Research on Tuberculosis and Mycobacteria of "Pedro Kouri" Institute of Tropical Medicine in the organization of the bacteriological resources for the diagnosis and screening of cases in the primary health care, in support of the national program for control of tuberculosis, was described in this paper. Reference was made to the functions and main scientific activities of this laboratory, which is a PAHO/WHO collaborating center at the forefront of the tuberculosis diagnosis laboratory network in the country. The introduction and the implementation of state-of-the-art technologies have allowed valuable tools to be used to meet several challenges posed by tuberculosis and mycobacteria nowadays. Thanks to the implementation of a World Fund against AIDS, tuberculosis and malaria project, the diagnosis network has strengthened, which must contribute to the elimination of tuberculosis as a health problem in Cuba in the near future.

Se describe la participación del Laboratorio Nacional de Referencia e Investigaciones en Tuberculosis y Micobacterias del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí", en la organización del recurso bacteriológico para el diagnóstico y la búsqueda de casos, fundamentalmente en la atención primaria de salud, en apoyo al Programa Nacional de Control de la Tuberculosis. Se hace referencia a las funciones y principales actividades científicas de este Laboratorio Nacional, Centro Colaborador OPS/OMS, como cabecera de los laboratorios de la red de diagnóstico de la tuberculosis en el país. La introducción y aplicación de nuevas tecnologías de avanzada permite contar con valiosas herramientas para dar respuesta a los diferentes retos que plantean la tuberculosis y las micobacteriosis en la actualidad. Con la ejecución de un proyecto del fondo mundial de lucha contra el sida, la tuberculosis y la malaria, se ha fortalecido la red de diagnóstico, lo que debe contribuir, en un futuro cercano, a la eliminación de la tuberculosis como problema de salud en Cuba.

The direct detection of pyrazinamide resistance in Mycobacterium tuberculosis is not routinely performed in many laboratories in the world because the drug is active only at acid pH, which also affects the growth of M. tuberculosis. The pyrazinamidase enzyme, encoded by pncA gene, is necessary to convert prodrug pyrazinamide to its active form. Taking into account that nicotinamide, a structural analogue of pyrazinamide, converted in its active forms by the pyrazinamidase enzyme at a physiological pH does not affect bacterial growth, the aim of this research was to evaluate two colorimetric methods: Nitrate reductase and malachite green microtube assays, using nicotinamide to perform susceptibility testing in 102 M. tuberculosis strains. The results were compared with those obtained by the classic Wayne assay. Mutations in the pncA gene were identified by sequencing the pncA gene from all isolates in which pyrazinamide resistance was detected by any of the three methods. Both the nitrate reductase and malachite green microtube assays showed sensitivities of 93.75% and specificities of 97.67%. Mutations in the pncA gene were found in 14 of 16 strains (87.5%) that were pyrazinamide resistant.

Los estudios de susceptibilidad a PZA no se realizan de rutina debido a que el pH ácido requerido para lograr la actividad de la droga, afecta el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis. La PZA es convertida en su forma activa por acción de la enzima pirazinamidasa (PZAasa) que es codificada por el gen pncA. Tomando en consideración que la enzima PZAasa es la responsable de convertir la nicotinamida (NIC), droga análoga de la PZA, en su forma activa sin requerir de un pH ácido, nos propusimos evaluar dos métodos colorimétricos: Método de la Nitrato Reductasa (MNR) y Microensayo Verde Malaquita (MVM) para conocer la susceptibilidad de 102 cepas de M. tuberculosis a la PZA empleando la NIC. Los resultados se compararon con el Ensayo Enzimático de Wayne (método de referencia). A las cepas resistentes y las que mostraron resultados discordantes, se les secuenció el gen pncA. Se alcanzó una sensibilidad del 93.75% y una especificidad del 97.67% para el MNR y el MVM. El 87.5% de las cepas resistentes (14/16) mostraron mutaciones en el gen pncA.

The protective efficacy of current Tuberculosis vaccine (BCG) against pulmonary tuberculosis and reactivation is variable and inefficient. This is the reason of the urgent search of new prophylactic alternatives for disease control. Different strategies using Mycobacteriun tuberculosis auxotrophic mutants, recombinant BCG or non-tuberculous micobacteria are carried out taking advantage of the use of live vaccines. Experimental evidences demonstrate protection conferred by the vaccination with live, inactivated or protein fraction of Mycobacterium ´habana ´ TMC-5135. Protection seems to be related to few virulence signs in animal models. Experimental results place M. ´habana ´ among vaccine candidates against tuberculosis meeting the condition of a ¨classic¨ vaccine to mimic natural infection as close as possible inducing strong immune protective response without causing extensive disease.

La eficacia protectora de la actual vacuna (BCG) contra la tuberculosis, para contrarrestar las formas pulmonares de esta enfermedad y su reactivación, resulta variable o poco eficiente, lo cual impone la búsqueda urgente de nuevas alternativas profilácticas contra esta enfermedad. Basados en las ventajas inmunogénicas que ofrece el uso de vacunas vivas, se han encaminado diferentes estrategias de este tipo empleando mutantes auxotróficos de Mycobacterium tuberculosis , BCG recombinante o micobacterias no tuberculosas. Existen evidencias experimentales acerca de la protección conferida tras la vacunación con cepas vivas, inactivadas o fracciones proteicas de Mycobacterium'habana' TMC-5135 contra la infección por Mycobacterium tuberculosis. Esta respuesta protectora parece ir aparejada de escasos signos de virulencia en los modelos animales ensayados, lo cual coloca a M.´habana´ dentro de los posibles candidatos vacunales contra la tuberculosis al ajustarse a la condición que impone una vacuna clásica de reproducir la infección y los eventos inmunes que le suceden lo más fielmente posible a como ocurren de manera natural, sin causar extensos daños en el receptor.

OBJECTIVE: Determine the prevalence of resistance to antitubercular drugs in Cuba in the 2000-2009 decade. METHODS: A prospective longitudinal study was conducted. The sample group consisted of 2  285 Mycobacterium tuberculosis isolates obtained from throughout the country in the period from 1 January 2000 to 31 December 2009. The proportion method was used in Löwenstein-Jensen media with the first-line drugs: isoniazid, streptomycin, ethambutol, and rifampicin. RESULTS: In the new cases and patients with a history of previous treatment, resistance was 8.5% and 37.0%, respectively. In these case categories, multidrug resistance was 0.4% and 8.8%, respectively. CONCLUSIONS: This study shows low prevalence of multidrug-resistant strains in Cuba. The results reflect the progress made by the national control program, which is currently working on the elimination of tuberculosis as a public health problem in the country.

OBJETIVO: Determinar la prevalencia de la resistencia a los fármacos antituberculosos en Cuba en el decenio 2000-2009. MÉTODOS: Se realizó un estudio prospectivo longitudinal. El universo de trabajo estuvo constituido por un total de 2 285 aislamientos de Mycobacterium tuberculosis obtenidos de todo el país en el período comprendido entre el 1 de enero de 2000 y el 31 de diciembre de 2009. Se empleó el método de las proporciones en medio Löwenstein-Jensen con los fármacos de primera línea: isoniazida, estreptomicina, etambutol y rifampicina. RESULTADOS: La resistencia entre los casos nuevos y los pacientes con antecedente de tratamiento previo fue de 8,5% y 37,0%, respectivamente; para estas mismas categorías de caso, la multirresistencia fue de 0,4% y 8,8%, respectivamente. CONCLUSIONES: El presente estudio muestra baja prevalencia de cepas multirresistentes en Cuba. Estos resultados reflejan los avances logrados por el programa nacional de control, que trabaja en la actualidad hacia la eliminación de la tuberculosis como problema de salud pública en el país.

Las meningoencefalitis por gérmenes oportunistas ocupan un lugar importante dentro de la patología neurológica del paciente sida, Treponema pallidum y Mycobacterium tuberculosis dentro de las bacterias, Cryptococcus neoformans dentro de los hongos, Toxoplasma gondii dentro de los protozoos y el Papovirus JC dentro de los virus, son de los gérmenes mas frecuentes dentro de cada grupo. También en los pacientes inmunodeprimidos en general y en particular en el paciente sida, se han encontrado con cierta frecuencia infecciones mixtas, precisamente por el gran deterioro en su barrera inmunológica. La meningitis tuberculosa (MTB) es la forma mas grave en que se manifiesta la tuberculosis extrapulmonar, pues la inespecificidad de sus síntomas, la lentitud en el diagnóstico etiológico y las severas secuelas neurológicas que puede producir sobre todo en este tipo de paciente, hacen de esta enfermedad un importante problema de salud, tanto en países desarrollados como en los que están en vías de desarrollo. En este estudio se describe el ¨primer caso¨ meningitis e infección diseminada por Mycobacterium tuberculosis en paciente cubano infectado por el virus de inmunodeficiencia humana.

Meningoencephalitis due to opportunistic germs has an important place among the neurological diseases in AIDS patient. Treponema pallidum and Mycobacterium tuberculosis (bacteria), Cryptococcus neoformans (fungi), Toxoplasma gondii (protozoa), and Papovirus JC (virus) are the most frequently germs found in each group. Likewise, in immunodepressed patients in general and in HIV/AIDS patients in particular, mixed infections have been frequently found, basically as a consequence of the patient’s deteriorated immunological barrier. Tuberculosis meningitis (TBM) is the most severe form of presentation of the extrapulmonary tuberculosis. Its unspecific symptoms, the delay in the etiological diagnosis, and the severe neurological sequelae that can appear in this specific type of patient make of this disease an important health problem, in both developed and developing countries. This study describes the "first case" of meningitis and disseminated infection by Mycobacterium tuberculosis in a Cuban patient infected by the human immunodeficiency virus.

Antecedentes: El cultivo bacteriológico, es la prueba de oro para el diagnóstico definitivo de la tuberculosis (TB). La finalidad del control de calidad es mejorar continuamente la eficiencia y el uso del cultivo como una alternativa de diagnóstico y monitoreo, asegurando que la información generada por el laboratorio sea confiable y exacta. Método: Se calcularon los indicadores de calidad (IC) a 5799 cultivos de las muestras de esputo de pacientes con TB pulmonar confirmada bacteriológicamente, recibidas en los laboratorios de diagnóstico de TB de la provincia Las Tunas, 4721 del laboratorio del Centro Provincial de Higiene y Epidemiología (CPHE) y 1078 del laboratorio del Centro Municipal de Higiene y Epidemiología (CMHE) de Puerto Padre, en el período de octubre del 2003 a septiembre del 2005. Resultados: En el CPHE la tasa de contaminación (TC), el aporte del cultivo al diagnóstico (ACD) y el % baciloscopía positiva con cultivo negativo fue de 4.3%, 34.8% y 6.3% respectivamente. En el laboratorio del CMHE la TC presentó un valor de 7.6% y el resto de los indicadores fue de 0%. Conclusiones y recomendaciones: Los indicadores de calidad del cultivo en el laboratorio del CPHE de Las Tunas, exceptuando el % BK (+) CU (-), presentaron valores aceptables para un buen desempeño del laboratorio; en el laboratorio del CMHE de Puerto Padre los valores de los IC, a excepción del % BK (+) CU (-), fueron superiores establecidos por las normas internacionales. Recomendamos incorporar el cálculo de los IC a la red nacional de laboratorios que realizan cultivo, para conocer y evaluar los resultados del trabajo e incorporar la evaluación de la sensibilidad del medio de cultivo para mejorar el rendimiento y la calidad del diagnóstico de la TB.

Background: The bacteriological culture, it is the golden test for the definitive diagnosis of the tuberculosis (TB). The purpose of the quality control is improve the efficiency and use of culture like an alternative of diagnosis and monitoring, and assuring that the information generated by the laboratory are reliable and exact. Method: The quality indicators (QI) were calculated in 5799 sputum samples, from patients with pulmonary TB confirmed by bacteriological culture, received in the TB diagnosis laboratories from Las Tunas province, 4721 from TB Laboratory of the Hygiene and Epidemiology Provincial Center (HEPC) and 1078 from TB Laboratory of the Hygiene and Epidemiology Municipal Center (HEMC) of the Puerto Padre municipality, from October 2003 to September 2005. Results: In the HEPC the contamination rate (CR), the culture contribution to the diagnosis (CCD) and the percent of positive baciloscopy with negative culture (% BK+ CU -) was 4.3%, 34.8% and 6.3% respectively. In the laboratory of the HEMC the CR was 7.6% and the rest of the indicators were 0%. Conclusions and recommendations: The QI of culture in the HEPC laboratory from Las Tunas municipality, excepting the % BK (+) CU (-) presented acceptable values for a good performance, in the HEMC laboratory from Puerto Padre municipality, the IC values, to exception of the % BK (+) CU (-), were superiors to the established for the international norms. We recommended incorporate the calculation of QI in the national network of laboratories culture, in order to improve the yield and quality of TB diagnosis.

Currently, lipid antigens of mycobacteria are attractive targets for the development of new tuberculosis vaccinal formulations. A lipid extract of Mycobacterium smegmatis cell wall was characterized using a Thin Layer Chromatography and Dot blot with human gammaglobulin. Mainly we identified the presence of phospholipids and micolic acids in the lipid extract showing a high recognition by human gammaglobulin. These results indicate the relevance of continuing immunoprotection studies with mycobacterial lipid antigens.

En la actualidad, los antígenos lipídicos de las micobacterias constituyen blancos atractivos para el desarrollo de nuevas formulaciones vacunales contra la tuberculosis. En nuestro trabajo se realizó la caracterización parcial de un extracto lipídico de pared celular de Mycobacterium smegmatis mediante cromatografía de capa delgada y Dot blot frente a gammaglobulina humana. Se identificó, fundamentalmente, la presencia de fosfolípidos y ácidos micólicos en el extracto lipídico y se observó un elevado reconocimiento de los mismos por la gammaglobulina humana, lo cual indica la importancia de continuar los estudios de inmunoprotección empleando antígenos lipídicos de micobacterias.

Con la aparición del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH), la tuberculosis ha tenido un significativo aumento, se ha planteado que esta coinfección es denominada como el "dúo mortal": uno acelera el avance de la otra y viceversa, por lo que cada día su temprano diagnóstico se hace más necesario. El objetivo de nuestro trabajo fue analizar, en el periodo de enero 2000 a diciembre 2006, la positividad en el diagnóstico bacteriológico de Mycobacterium tuberculosis en pacientes sintomáticos, incluyendo los pacientes VIH+/SIDA tratados en nuestra Institución Hospitalaria. Las muestras estudiadas fueron procesadas por las técnicas establecidas para el diagnóstico convencional; examen directo, examen de cultivo, e identificación. Mycobacterium tuberculosis solamente fue aislado de un total de 8151 muestras analizadas, en 205 muestras para un 2.5% de positividad; conjuntamente a las cepas identificadas se les realizó estudios de resistencia y/o sensibilidad por el método de Canetti, donde no se encontró cepas resistentes a ninguna de las drogas antibacilares empleadas, por lo que afirmamos que estudios como éste son imprescindibles para la vigilancia epidemiológica de esta enfermedad. Los resultados obtenidos muestran que la asociación VIH/SIDA/TB en nuestro país ha evolucionado en forma lenta, el incremento no es comparable con los reportados en la literatura internacional, demostrando la eficiencia de los Programas Nacionales de Control establecidos para estas dos enfermedades.

Favored by the appearance of the human immunodeficiency virus (HIV), tuberculosis has significantly increased. It has been stated that TB and HIV make a lethal partnership: one accelerating the advance of the other and viceversa; that iswhy early diagnosis of TB has become so important. This paper is aimed at analysing the positivity of the bacteriological diagnosis of Mycobacterium tuberculosis in our laboratory, from January 2000 to December 2006, in symptomatic patients, including HIV+ patients receiving treatment in our institution. All samples studied were processed by conventionaldiagnostic techniques, direct examination as well as by culture and identification tests. A total of 8151 samples were analysed, but Mycobacterium tuberculosis was isolated in only 205 of those samples for a 2,5% of positivity. Susceptibility test, through Canetti’s method, was applied to the strains isolated; no resistant strains to any of the antitubercular drugs used were observed. This fact makes us state that these types of studies are extremely important for the epidemiological surveillance of this disease. Results obtained show that the HIV/AIDS/TB association in our country has evolved slowly and that its increase is not comparable to that reported in the international literature, this show the efficient of the two National Control Programs for this diseases.

El control de calidad de la baciloscopía (BK), es un sistema diseñado para mejorar la habilidad, eficiencia y el uso de la microscopía, como opción de diagnóstico y monitoreo, asegurando que la información generada por el mismo, sea exacta, fiable y reproducible. El objetivo del estudio fue evaluar los indicadores de calidad de la BK en los laboratorios de diagnóstico de tuberculosis de los Centros Provinciales de Higiene y Epidemiología de Cuba. Se realizó el control de calidad a 2054 láminas en el periodo enero - diciembre del 2006, según lo establecido en el Manual de Procedimientos del Programa Nacional de Control de Tuberculosis. De las láminas evaluadas, 269 (13.1%) presentaron codificaciones altas, 81 (3,9%) codificaciones bajas y 1704 (83%) fueron negativas. La tasa de error para todos falsos positivos fue de 1,1%; no se identificaron resultados falsos negativos. El índice de kappa general obtenido fue de 0,9949. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo presentaron valores superiores al 99%. Estos resultados sugieren la calidad del personal que realiza la BK de tuberculosis en los laboratorios provinciales y recomendamos no descuidar las continuas supervisiones y mantener un programa de entrenamiento constante de los técnicos para continuar mejorando la calidad del diagnóstico baciloscópico en Cuba.

Introduction: The quality control of acid fast bacilli (AFB) sputum smears has a purpose to improve the efficiency and reliability of the laboratory services, assuring that the information generated by the same, it was an exact and reliable. Objective: to evaluate the quality indicators AFB smears in the tuberculosis (TB) laboratories of the Hygiene and Epidemiology Provincial Centres from Cuba. Method: it was evaluated the quality of to 2054 slides from January to December of 2006, according to the established in the Procedures of the National Control Program of TB manual. Results:, 269 (13.1%) from the evaluated slides presented high codification, 81 (3.9%) were low codification and 1704 (83%) were negative. The rate of error for all false positive was 1,1%; didn’t identify false negative results. The index of general kappa obtained was 0, 9949. The values of sensibility, specificity, predictive positive and negative value were superior to the 99%. Conclusions and recommendations: These results suggest the quality of the personnel that carries out the microscopy of AFB smears in the provincial laboratories and recommended the continuous training of the technicians for continue improving the quality of the baciloscopy diagnosis in Cuba.

The amplification of a fragment from hsp65 gene by polymerase chain reaction (PCR) followed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis with BstEll and Haelll restriction enzymes has demonstrated to be very useful for identification of Non-Tuberculous Mycobacteria (NTM). The biochemical tests as well as the PCR-RFLP were carried out in 13 reference strains and 46 strains received in the laboratory. The results by biochemical tests were available in 4-6 weeks whereas the PCR-RFLP only required 48 hours. In both methods, Mycobacterium intracellulare, M. kansasii and M. fortuitum were the most frequently detected species. The PCR-RFLP method is fast, cheap and simple. Its application in Reference Laboratories could be very useful for diagnosis of NTM

La amplificación por reacción de la polimersa en cadena (RPC) de un fragmento del gen hsp65, seguido del análisis del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (PLFR) por las enzimas BstEll y Haelll, ha demostrado ser muy útil en la identificación de micobacterias no tuberculosas (MNT). En el presente trabajo se les realizó una batería de pruebas bioquímicas así como la RPC-PLFR a un total de 13 cepas de referencia y 46 cepas recibidas en el laboratorio. Los resultados de las pruebas bioquímicas estuvieron disponibles entre 4 a 6 semanas, a diferencia de la RPC-PLFR que requirieron de sólo 48 horas. En ambos métodos, las especies detectadas con mayor frecuencia fueron Mycobacetrium intracellulare, M. kansasii y M. fortuitum. La RPC-PLFR es un método rápido, sencillo y eficaz. Su aplicación en los Laboratorios de Referencia pudiera ser de gran utilidad para el diagnóstico de MNT